qPCR染料法的原理

qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料（通常为SYBR Green I），游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号，但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上，并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加，越来越多的染料与双链DNA结合，产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光强度计算目的基因的扩增量，进而获得待测样本中目的基因的初始含量。

qPCR染料法的注意事项

由于荧光染料与双链DNA的结合是非特异性的，因此PCR体系中的非特异性扩增产物、引物二聚体等双链DNA也会导致荧光强度的变化，因此在实际应用中需要借助qPCR最后阶段产生的熔解曲线判断体系中是否存在引物二聚体和非特异性扩增。若熔解曲线是单峰，表明体系中的其他双链DNA较少，实验结果较为准确。若出现多峰，表明体系中存在非特异性扩增或引物二聚体，可以通过阴性对照（NRT,NTC）判断非特异性双链DNA的来源，若双链DNA来源于非特异性扩增或引物二聚体，需重新设计定量引物；若双链DNA来源于样品或体系污染，则需要重新配置qPCR体系。

qPCR染料法的优势

染料法无需设计特异性的荧光探针，因此实验步骤更简单、成本更低，被广泛地应用于基因表达量研究和转基因动植物的研究。

返回搜狐，查看更多

责任编辑：