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【维真生物-知识分享】RNAi常用工具比较:siRNA和shRNA

siRNA和shRNA作用原理

shRNA和siRNA都是通过RNAi途径介导基因的沉默,但两者转染媒介、构建方式和细胞内加工过程不完全相同。

siRNA可以在体外合成后通过转染进入细胞,也可以将其dsRNA前体转染入细胞,dsRNA在细胞质内经过一系列酶处理,形成siRNA,之后siRNA与RISC结合并介导RISC与靶mRNA结合,导致靶mRNA的切割和降解。

shRNA则需构建至表达载体中,利用质粒或病毒媒介进入细胞,在细胞核内通过转录和剪切形成,之后shRNA转运出细胞核,在细胞质内经过Dicer酶处理后形成siRNA,进而导致靶mRNA的切割和降解。

siRNA和shRNA的作用机制

siRNA和shRNA的区别

1. shRNA具有更长的作用时效:siRNA的稳定性较低,进入细胞后会逐渐被降解,因此只能在短期内(一周左右)实现对靶基因的沉默;shRNA借助表达载体可以在细胞内大量转录,因此靶基因的沉默时效更长,可以持续数个星期。

2. shRNA对于难转染的细胞效果更好:siRNA主要通过转染进入细胞,难转染的细胞会严重影响siRNA的功能;shRNA可借助病毒导入细胞,对于难转染的细胞仍然有很高的导入效率,因此对于难转染的细胞干扰效果更好。

3. shRNA脱靶率更低:有证据表明shRNA的脱靶更低,可能是由于siRNA在细胞质中逐渐降解导致脱靶。

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